第281章 变异感染者DNA提取（2/2）
5 使用前检查buffer bl 是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。</p>
完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行dna的提取。</p>
具体操作步骤如下：</p>
1 向96 圆孔板的每孔中加入20 ul 蛋白酶k。</p>
2 加200 ul 抗凝全血到96 圆孔板中。</p>
~undefed 若全血样品体积少于200 ul，用pbs 补充到200 ul。</p>
~undefed 若样品为鸟类血，样品用量须低于10 ul。</p>
~undefed 若需得到rna-free 的基因组dna，在步骤3 加入buffer bl 前加入dnase-free 的rnase a(20 g/ l) 。</p>
3 加200 ul buffer bl ，注意不要打湿每孔的边缘，用96 圆孔硅胶片密封各孔。</p>
4 用力混合30 s。</p>
5 3000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。</p>
6 在培养箱或烘箱中70c温浴至少10 。</p>
7 3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000rp后即停止。</p>
8 取下96 圆孔硅胶片，每孔加入200 ul 乙醇（96-100）。</p>
9 用96 圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15 s。3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3 000 rp 后即停止。</p>
</p>
10 将96 孔dna 板放到一洁净的96 孔16 l 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96 孔dna 板 中，6 000 rp 离心4 。</p>
11 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液，将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上，每孔加入500 ul buffer w1b，用一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板，6 000 rp 离心4 。</p>
~undefed 确认在buffer w1b ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。</p>
12 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液，将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上，每孔加入850 ul buffer w2，用另一新 的bf-400膜密封96孔dna板，6 000 rp 离心4 。</p>
~undefed 确认在buffer w2 ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。</p>
13 弃滤液，将96孔dna板放回到96孔16 l 深孔板上，每孔加入400 ul buffer w2， 用另一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板，6 000 rp 离心4 。</p>
14 将96孔dna板放在一洁净的96 孔16 l 深孔板上，用bf-400膜密封96孔dna板，6 000 rp离心15 。</p>
15 将96孔dna板放在另一洁净的96 孔16 l 深孔板上，每孔加入100-200 ul eent b 或去离子水，室温静置2 ，用另一新的bf-400膜密封96 孔dna板，6 000 rp 离心4洗脱得到dna。</p>
看着最终提取出来的dna样本，钟教授终于露出了满意的微笑</p>
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